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單克隆抗體的鑒定
更新時間:2019-09-02   點擊次數(shù):1690次

對制備的McAb進行系統(tǒng)的鑒定是十分必要的,應做下述幾個方面的鑒定:

1.抗體特異性的鑒定

除用免疫原(抗原)進行抗體的檢測外,還應該用與其抗原成分相關(guān)的其它抗原進行交叉試驗,方法可用ELISA、IFA法。例如:

 制備抗黑色素瘤細胞的McAb,除用黑色素瘤細胞反應外,還應該用其它臟器的腫瘤細胞和正常細胞進行交叉反應,以便挑選腫瘤特異性或腫瘤相關(guān)抗原的單克隆抗體。

 制備抗重組的細胞因子的單克隆抗體,應首先考慮是否與表達菌株的蛋白有交叉反應,其次是與其它細胞因子間有無交叉。

 

2.McAb的Ig類與亞類的鑒定

一般在用酶標或熒光素標記的第二抗體進行篩選時已經(jīng)基本上確定了抗體的Ig類型。如果用的是酶標或熒光素標記的兔抗鼠IgG或IgM,則檢測出來的抗體一般是IgG類或IgM類。至于亞類則需要用標準抗亞類血清系統(tǒng)作雙擴或夾心ELISA來確定。在作雙擴試驗時,如加入適量的PEG(3%),更有利于沉淀線的形成。

 

3.McAb中和活性的鑒定

用動物或細胞的保護實驗來確定McAb的生物學活性。例如,如果確定抗病毒McAb的中和活性,則可用抗體和病毒同時接種于易感的動物或敏感的細胞,來觀察動物或細胞是否得到抗體的保護。

 

多克隆抗體的制備一般包括以下幾個步驟: 

1、制備抗原。

2、選擇實驗動物。 

3、動物免疫。

4、試取血進行測試,看看是否成功免疫。

5、如果成功免疫,殺死實驗動物,采集全部血清。

6、純化出抗體。

7、鑒定抗體,包括純度以及特異性。

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